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C18 反相色譜柱是高效液相色譜（HPLC）中最常用的一種色譜柱，它的分離原理基于反相分配色譜的原理。

在反相分配色譜中，固定相是一種非極性的吸附劑，如 C18 硅膠，而流動相則是極性的溶劑，如甲醇、乙腈等。樣品中的各個組分在流動相和固定相之間的分配系數不同，從而實現分離。

當樣品流經 C18 反相色譜柱時，樣品中的各個組分會與固定相上的 C18 硅膠相互作用，由于 C18 硅膠是非極性的，樣品中的極性組分會更容易被固定相吸附，而非極性組分則會更容易被流動相帶走。因此，極性組分在 C18 反相色譜柱中的保留時間會更長，而非極性組分則會更快地流出。

此外，C18 反相色譜柱還可以通過改變流動相的組成和 pH 值等參數，調節樣品中各個組分與固定相之間的相互作用，從而實現更好的分離效果。例如，在酸性流動相中，弱堿性化合物的保留時間會延長，從而提高它們的分離效率。

總之，C18 反相色譜柱的分離原理是基于反相分配色譜的原理，通過樣品中各個組分與固定相上的 C18 硅膠相互作用，實現不同組分的分離。通過改變流動相的組成和 pH 值等參數，可以調節樣品中各個組分的保留時間和分離效率，從而實現更好的分離效果。